Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

摘要

目的构建anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体,并进行初步表达.方法采用重叠延伸拼接法(splicing by overlap extention, SOE)将anti-CD3 scFv和B7.1(V+C)两个基因片段通过spacer 序列连接,将融合基因克隆入T 载体,并测序证实.在此基础上构建真核表达载体pcDNA/ anti-CD3 scFv-B7.1, 并经脂质体法转染COS-7细胞,免疫组织化学法检测表达.结果获得了序列与预期完全相同的融合基因;构建了抗CD3 scFv-B7.1融合基因真核表达载体;在COS-7细胞中获得初步表达.结论成功构建及表达抗CD3 scFv-B7.1融合基因真核表达载体,为进一步研究抗CD3 scFv-B7.1双功能分子的生物学活性及用于肿瘤生物治疗奠定了基础.