基因拼装构建c-myc-hTFF2融合基因克隆载体pBS-TFF2

摘要

目的 体外拼装带c-myc分子标签的人三叶因子家族2(human trefoil factor family 2,hTFF2)的融合基因c-myc-htff2,并构建其克隆载体pBS-TFF2,以便为进一步构建TFF2各种表达载体打下基础.方法 根据hTFF2氨基酸序列,结合乳酸链球菌氨基酸表达密码子,设计编码htff2的基因序列(cDNA);在其上游添加c-myc碱基序列作为分子标签,设计融合基因c-myc-htff2;参照pBluescriptⅡ sk(+)载体的酶切位点碱基序列,分别在c-myc-htff2的5'和3'端设计SalⅠ和BamHⅠ酶切位点;用DNAWORKS在线程序指导,将c-myc-htff2设计成14个相互互补的寡核苷酸片段,经PCR扩增得到目的基因片段c-myc-htff2;再将目的基因片段亚克隆至pBluescriptⅡ sk(+)载体,进行酶切鉴定及DNA测序.结果 成功地在体外拼装了c-myc-htff2基因,完成了pBS-TFF2构建,且DNA测序结果与设计序列完全一致.结论 在DNAWORKS程序指导下设计寡核苷酸并进行体外基因拼装是合成目的基因的有效方法;成功构建了c-myc-htff2融合基因的克隆载体pBS-TFF2.