丙型肝炎病毒1b DY株ns5a基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

目的 克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因.方法 运用原核细胞基因工程技术.设计目的 基因的特异引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出约480 bp的目的 片段,将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再亚克隆到原核表达载体pET-28a中;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达;采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白的表达水平.结果 成功构建了含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体,并得以表达.结论 成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造了条件.