酵母双杂交技术筛选人PIF1解螺旋酶相互作用蛋白

摘要

目的 应用酵母双杂交技术研究筛选与人类PIF1解螺旋酶相互作用的蛋白.方法 应用酵母双杂交技术,以人PIF1蛋白PINT功能域(1～180氨基酸)和解螺旋酶模序(167～926氨基酸)为诱饵,与HeLa细胞cDNA文库杂交,筛选能与人PIF1蛋白不同功能域相互作用的蛋白.结合生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交及β-galactosidase实验等确定阳性克隆.结果 PIF1蛋白PINT功能域杂交共获得17个阳性克隆,生物信息学分析有3个阳性基因,它们分别是CCNDBP1、OTUD5、CAP1.而PIF1蛋白解螺旋酶模序未获得阳性克隆.结论 PIF1蛋白的PINT功能域对调控PIF1的生理功能具有非常重要的作用.