利用GpC DNA甲基化酶M.CviPI高效表达限制性内切酶Pst Ⅰ

摘要

源自原核生物"限制-修饰"系统的限制性内切酶是生命科学研究的重要工具酶.将小球藻Chlorella病毒NYs-1的GpC DNA甲基化酶M.CviPI导入大肠杆菌表达宿主ER2566,高效表达限制酶PstⅠ的基因,再通过简便的Ni亲和、阴离子交换两步层析纯化获得重组限制酶PstⅠ.结果表明,该重组限制酶的蛋白纯度达到90%以上,比活力达到640 000U·mg^(-1),并具有快速酶切性能,能够在15min内完成1μg底物λDNA的消化,达到商业化限制酶PstⅠ的质量标准.