慢病毒介导microRNA-214在成牙骨质细胞分化过程中的作用

摘要

目的：构建microRNA-214沉默慢病毒载体并研究其在成牙骨质细胞分化过程中的作用。方法：常规条件下培养成牙骨质细胞系，并对其进行矿化诱导，检测牙骨质分化及矿化相关标记物的变化。随后，构建microRNA-214沉默慢病毒载体并感染成牙骨质细胞，荧光显微镜观察其感染效率，并用茜素红和Vonkossa染色检测不同组成牙骨质细胞的矿化能力，最后检测不同组之间牙骨质分化标志物的变化。结果：Real-timePCR结果显示，随着诱导时间的延长，成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、BSP、OCN、Col1a和CAPmRNA的相对表达量逐渐增加。空白组、阴性对照组和microRNA-214沉默载体组感染成牙骨质细胞系比率达到90%以上。相对于空白组和阴性对照组，microRNA-214沉默组microRNA-214的表达量显著下降，这表明microRNA-214沉默载体很好地发挥了沉默功能。相对于空白组和阴性对照组，microRNA-214沉默组能显著提高成牙骨质细胞的增殖速率。成牙骨质细胞矿化程度的检测发现，相对于空白组和阴性对照组，microRNA-214沉默组矿化结节数量增多，形态变大。同时，成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、OCN、Col1a、BSP和CAP的表达量在microRNA-214沉默组中均显著增加。结论：microRNA-214沉默能够促进成牙骨质细胞分化。