澳洲坚果SCoT反应体系的建立及应用

摘要

为建立澳洲坚果(Macadamia spp.)的SCoT 最适反应体系,用单因素设计方法对影响SCoT-PCR 反应体系的主要影响因素进行了优化筛选,并构建了澳洲坚果种质的指纹图谱.结果表明,澳洲坚果的SCoT 最适反应体系为:反应体系总体积为20 μL,包含2.5 mmol L-1 Mg2+,0.3 mmol L-1 dNTPs,0.8 μmol L-1 引物,40 mg L-1 模板DNA 和1.0 U Taq DNA 聚合酶.最适退火温度为50℃.该反应体系对澳洲坚果种质具有良好的稳定性、可靠性和较高的分辨率.选用多态性良好的单引物SC5 和引物组合SC34 + SC39,可以将12 份澳洲坚果种质完全区分开,每份种质都各有独特的指纹图谱,置信概率达到99.988%.构建的SCoT 反应体系可为澳洲坚果种质鉴定和遗传多样性分析等提供技术支持.