miR-205-5p通过抑制UHRF1表达促进大鼠周围神经再生的研究进展

摘要

目的 探讨周围神经损伤后微小RNA-205-5p(miR-205-5p)的表达情况及miR-205-5p是否具有调控周围神经修复和再生的作用。方法 选取0~2d龄雄性SD大鼠10只,质量5~6g,平均5.7g,用于提取背根神经节细胞;选取雄性SD大鼠30只用于体内实验,6~8周龄,质量200~240g,平均214.6g。钝性分离麻醉后的SD大鼠左后肢皮肤及肌肉,暴露坐骨神经,在靠近背根神经节一端距离坐骨神经分叉处1cm的位置用止血钳挤压10s,将肌肉和表皮进行缝合。采用实时荧光定量PCR法(Q-PCR)检测miR-205-5p在损伤和未损伤大鼠的背根神经节(DRG)组织及细胞中的表达情况,通过脂质体法将miR-205-5p(mimics)转入背根神经节细胞(DRGs),以转入阴性对照NC-mimics(negative control-mimics)作为对照组,观察DRGs轴突的生长情况。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-205-5p是否直接靶向结合泛素样PHD和环指结构域蛋白1(UHRF1)基因。采用Q-PCR和蛋白印迹法检测过表达miR-205-5p-mimics后对UHRF1 mRNA及蛋白表达的影响。将miR-205-5p-抑制物和UHRF1的小干扰RNA(si-UHRF1)同时转入DRGs,观察DRGs轴突的生长情况。结果 miR-205-5p在损伤的细胞和组织中的表达水平明显低于未损伤的细胞和组织(P<0.05);与对照组相比,miR-205-5p过表达对背根神经节细胞最长轴突和轴突总长度具有明显的抑制作用(P<0.05);荧光素酶报告基因系统验证结果显示,miR-205-5p直接靶向结合UHRF1基因,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,转染miR-205-5p-mimics后背根神经节细胞中UHRF1 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P<0.05);将miR-205-5p-抑制物和UHRF1的小干扰RNA(si-UHRF1)同时转入背根神经节细胞后,抑制UHRF1表达能明显减弱miR-205-5p-抑制物对背根神经节细胞轴突的促进作用(P<0.05)。结论 miR-205-5p通过调节UHRF1来调节大鼠周围神经修复与再生。