核小体泛素连接酶Bre1的eRING结构域与泛素转移酶Rad6的相互作用研究

摘要

目的:探究乳酸克鲁维酵母核小体泛素连接酶Bre1的eRING结构域与泛素转移酶Rad6的相互作用,解析Bre1的RBD结构域对该相互作用的影响。方法:在大肠杆菌中表达乳酸克鲁维酵母的GST-Rad6、Rad6、Bre1 eRING等蛋白并将它们纯化至纯度>95%,通过GST-Rad6下拉实验,结合蛋白免疫印迹实验研究GST-Rad6和Bre1的eRING结构域的相互作用及Bre1的RBD结构域对其相互作用的影响;通过SPR实验研究Rad6与Bre1的eRING结构域之间的相互作用。结果:乳酸克鲁维酵母的GST-Rad6与Bre1的e RING结构域存在相互作用,该相互作用可以被Bre1 RBD所抑制;GST蛋白与乳酸克鲁维酵母Bre1的eRING存在相互作用,不可作为该蛋白的下拉标签使用。结论:Rad6与Bre1的eRING结构域存在相互作用,该相互作用可以被RBD所抑制,GST标签不适于乳酸克鲁维酵母的eRING相互作用研究。