发根农杆菌介导的茶树发根高频诱导与遗传转化

摘要

以两种野生型发根农杆菌菌株、三种共培养培养基和六种外植体为试材,建立了茶树发根高频诱导体系,最高发根诱导频率达30%以上.最佳发根诱导体系为:OD600为0.5～0.8的发根农杆菌菌液侵染已培养60～70 d苗龄无菌苗茎段10～50 min,在添加100 mmol/L乙酰丁香酮的YMB固体培养基上共培养2 d,在含500 mg/L头胞噻肟钠的MS培养基上诱导发根.发根在不含激素的LG0培养基上生长迅速,产生大量侧枝和根毛.PCR证实,发根农杆菌Ri质粒T-DNA的rolA、rolB和rolC基因已经插入到发根基因组DNA中.应用此发根诱导体系,以含携带Bt基因的双元载体质粒pCAMBIA2301的发根农杆菌15834,侵染茶树外植体诱导出发根,PCR和GUS组织化学染色证实外源基因已经插入到基因组DNA中并获得表达.