发根农杆菌介导的杜梨毛状根遗传转化方法

摘要

以杜梨(Pyrus betulaefolia)为研究材料,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)开发了一种简单、快速、高效的杜梨毛状根遗传转化方法.将含有mCherry基因的表达载体pROK2导入发根农杆菌K599,侵染杜梨幼苗,通过注射烟草叶片、常规PCR及体视显微镜观察,检测转化效率.结果表明,利用侵染烟草叶片瞬时表达的方法,证明mCherry可以正常表达;发根农杆菌侵染40株杜梨后,再生毛状根植株为34株,再生率达85％,通过PCR鉴定,转基因毛状根长势良好且鉴定为阳性的植株有6株,阳性率达到17.6％;经体视显微镜观察,可以在转基因根中直接观察到mCherry的红色荧光.通过发根农杆菌直接侵染杜梨苗的方法,成功实现了外源基因在杜梨新生不定根中的表达,操作简便,转化率高,周期较短,为梨树基因功能研究和遗传改良提供了新型工具,为提高梨树遗传转化成功率奠定了基础.