脐血和成人外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的分离及功能特征的比较

摘要

目的分离成人外周血、脐血CD4+CD25+调节性T细胞,并检测其功能,以了解脐血CD4+CD25+T细胞的特性。方法应用免疫磁珠分选法从健康成人外周血、脐血淋巴细胞中分离纯化CD4+CD25+、CD4+CD25-T细胞。应用流式细胞术检测分离纯度,胎盘蓝染色检测细胞存活率;RT-PCR技术检测CD4+CD25+、CD4+CD25-T细胞中Foxp3的mRNA的表达;体外增殖实验检测其对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用。结果 MACS分离的CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞纯度达(92.7±1.6)%、(90.3±1.2)%,细胞存活率达(95.3±2.1)%;体外经抗CD3、CD28单克隆抗体刺激培养的脐血及成人外周血CD4+CD25+T细胞同时得到扩增,而且高表达Foxp3;CD4+CD25+T细胞能有效的抑制效应T细胞的增殖,当效靶比为1︰1时,其抑制效应T细胞的作用最强,成人外周血抑制率为(81.36±1.61)%、脐血抑制率为(90.74±2.43)%。结论脐血和成人外周血CD4+CD25+T细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,与成人外周血相比,培养后的脐血CD4+CD25+T细胞比成人外周血有更强的免疫抑制功能。