Wistar大鼠卵巢颗粒细胞的分离、培养与鉴定

摘要

目的 探讨Wistar大鼠卵巢颗粒细胞的分离、培养与鉴定的方法.方法 选用21～29天龄wistar大鼠,皮下注射PMSG,取出卵巢,采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞,于CO2培养箱中培养.用HE染色和免疫细胞化学法观察FSHR蛋白表达的方法来对卵巢颗粒细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线,同时检测E2、P的分泌情况.结果 分离培养出的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞存活率＞90％,细胞纯度达到90％以上；体外培养的颗粒细胞对数生长期为48～ 96小时；HE染色在镜下可见贴壁细胞形态完整,细胞浆和细胞核染色均匀,核染深蓝色,位于细胞中央,胞浆淡红色并含有许多颗粒；激素的分泌趋势与细胞的生长情况基本一致,于在96～ 120小时左右达到峰值,随后逐渐下降.结论 采用机械分离法分离培养的卵巢颗粒细胞纯度高、活性好,用FSHR表达染色鉴定颗粒细胞是一种简便快速的方法.