新生Wistar大鼠心肌细胞原代培养及其鉴定

摘要

目的：
　　 建立稳定的乳鼠心肌细胞原代培养方法，提高心肌细胞纯度。
　　 研究对象与方法
　　 选择1-3天龄的Wistar大鼠12只，雌雄不拘，由中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供。采用联合酶消化法提取心肌细胞，差速贴壁1.5h联合应用5-BrdU进行心肌细胞纯化，用台盼蓝染色法检测心肌细胞活性，倒置显微镜下进行心肌细胞形态学观察，采用免疫荧光染色进行心肌细胞纯度检测。
　　 结果：
　　 台盼蓝染色提示心肌细胞存活率均大于95％，倒置显微镜下观察:培养24h时心肌细胞几乎完全贴壁，可见单个细胞搏动;48h时心肌细胞间交联成片并出现规律搏动;72h时经细胞免疫荧光检测心肌细胞纯度高达95％以上。
　　 结论：
　　 采用差速贴壁联合应用5-BrdU可获得高纯度的心肌细胞，是纯化心肌细胞的有效方法。

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