荷斯坦奶牛miR-146a的组织表达分析及靶基因验证

摘要

试验旨在获得荷斯坦奶牛miR-146a组织表达谱,利用靶基因预测软件预测miR-146a可能的靶基因,并进一步验证预测的靶基因,完善miR-146a在奶牛乳腺炎免疫过程中的分子调控机制.本研究随机选取健康和患乳腺炎荷斯坦奶牛各5头,屠宰后分别采集健康荷斯坦奶牛心、肝、脾、肺、肾和乳腺组织,患乳腺炎奶牛乳腺组织;提取组织总RNA,利用Stem-loop RT-PCR法检测miR-146a的表达水平;利用TargetScan和RNAhybrid软件预测miR-146a的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因检测系统验证预测的靶基因.结果表明,荷斯坦奶牛miR-146a在健康奶牛乳腺组织中具有较高的表达水平,患乳腺炎奶牛乳腺组织中miR-146a表达水平极显著高于健康奶牛;经软件预测分析和双荧光素酶报告基因检测系统进一步验证发现,miR-146a能够靶向作用于免疫过程中具有关键作用的基因TRAF6和TLR4.这些结果表明miR-146a在荷斯坦奶牛乳腺炎免疫过程中具有重要的调控作用.