超声介导微泡空化增加鼠肺内皮细胞基因转染及其作用机制

摘要

目的 初步探讨超声介导声学微泡"空化效应"对鼠肺微血管内皮细胞基因转染的影响及其作用机制.方法 6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞,加20μg报告基因质粒EGFP及10%白蛋白微泡(全氟显),连续波超声照射进行微泡"空化",观察不同照射时间相同机械指数(MI=1.0)(A组:30 s;B组:60 s;C组:90 s;D组:120 s;E组:180 s)及不同MI相同照射时间(60 s)(B1组:MI 0.5;B2组:MI 0.75;B3组:MI 1.0;B4组:MI 1.5;B5组:MI 1.8)报告基因转染情况.以激光共聚焦观察细胞膜膜流动性、免疫荧光观察细胞微管蛋白及微丝蛋白.结果 反应细胞膜流动性的荧光恢复强度分别为A组0.173±0.013、B组0.250±0.037、C组0.364±0.022、D组0.381±0.019、E组0.395±0.009(与A组相比,P＜0.01);B1组0.171±0.017、B2组0.255±0.026、B3组0.378±0.007、B4组0.382±0.009、B5组0.397±0.008(与Bl组相比,P＜0.01).反应细胞微管蛋白变化的荧光强度分别为A组159.15±4.79、B组188.23±6.20、C组205.80±4.48、D组208.99±8.34、E组213.70±5.09(与A组相比,P＜0.01);B1组176.84±3.10、B2组187.57±14.52、B3组206.41±11.66、B4组220.12±13.39、B5组221.16±12.78(与B1组相比,P＜0.01);各组微丝蛋白结构完整,无断裂及紊乱,荧光强度差别无统计学差异.结论 超声介导微泡空化能增加基因转染率,对细胞骨架无明显损伤;当MI为1.0时,随照时延长细胞膜流动性及细胞骨架微管蛋白荧光强度增强;当照射时间为60 s,随MI增高细胞膜流动性及细胞骨架微管蛋白荧光增强,但两种条件下均存在一定阈值;微丝蛋白荧光强度不随超声照射模式而改变.