A549细胞炎症氧化应激模型Nox1启动子差异结合蛋白的筛选

摘要

目的 在炎症氧化应激细胞模型中筛选参与Nox1启动子活化的相关调控蛋白.方法 TNF-α激A549细胞建立炎症氧化应激细胞模型,运用DNA pull-down技术筛选出Nox1启动子区结合蛋白,再用二维凝胶电泳技术分离pull-down后的结合蛋白,然后在2D凝胶上选取与对照组表达差异大于1.5倍的蛋白质点进行切胶,最后经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,筛选出Nox1启动子区差异结合蛋白.结果 2D凝胶上共筛选出1.5倍以上差异蛋白点7个,均为表达上调蛋白,鉴定出GLE1 、DDX19A,KRT1、KRT10四种蛋白质.结论 GLE1、DDX 19A,KRT1、KRT10参与了TNF-α诱导的A549细胞Nox1活化的基因调控,为研究炎症氧化应激细胞模型的Nox1启动子区调控蛋白的生物学功能奠定了实验基础.