基于RAM-HPLC在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

摘要

目的 通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法,实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米.方法 以自制限进填料柱为预处理柱,LunaC18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇(95:5,V/V),含体积百分数为0.1％的甲酸,流速为1 ml/min;分析流动相为血浆:甲醇-水(65:35,V/V),尿液:甲醇-水(55:45,V/V),均含体积百分数为0.1％的甲酸,流速均为1 ml/min,柱温为25℃;检测波长为274nm.结果 呋塞米血浆样品在进样100 μ1时,富集效果良好,在0.1～3.2 μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9995),尿液进样20 μl,呋塞米浓度在0.5～32 μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9991),血样及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82％～113.36％,98.75％～112.27％,日内日间精密度均小于5％.结论 药代动力学参数AUC0→24为6.265 μg/(ml·h),t1/2为2.447h,Cmax为1.414μg/ml;24 h内呋塞米的累积排泄率为32.50％～39.08％.本方法简单快速,适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测.