重组禽呼肠孤病毒S1133σ3基因表达及其免疫原性研究

摘要

【目的】构建禽呼肠孤病毒（ARV）S1133σ3基因的真核重组质粒，研究其表达蛋白的免疫原性，为研发ARV基因疫苗奠定基础。【方法】采用RT—PCR对ARVS1133毒株的盯3基因进行RT—PCR扩增，扩增产物与真核表达载体pcDNA3．1（＋）连接后，转化大肠杆菌DH5（x，然后提取重组质粒的DNA，经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3．1一（r3免疫7日龄SPF雏鸡，同时设灭活S1133、表达盯3蛋白及生理盐水对照，二次加强免疫两周后，采用Westernblotting检测鸡群血清抗体；并用S1133毒株进行攻毒，4d后进行ARV检测。【结果】重组质粒pcDNA3．1-σ3的双酶切和RT—PCR扩增鉴定结果一致，均能扩增出约999bp目的条带；免疫攻毒试验结果表明，pcDNA3．1-σ3处理、灭活S1133处理、表达盯3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7．4％、3．7％、11．1％和29．6％，pcDNA一仃3处理与生理盐水处理的差异显著（P〈0．05），但与灭活S1133处理、表达盯3蛋白处理的差异不显著（P〉0．05）；病毒检出部位最高是关节，其次是胸腺和。肾脏，胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARVS1133σ3蛋白具有较好的免疫保护，可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。