抗黄曲霉毒素B1单链抗体基因克隆及其结构分析

摘要

【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1（AFB1）单链抗体（scFv）基因，并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测，为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料，通过PCR扩增重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），以（Gly4Ser）3为柔性接头（Linker）拼接构建抗AFB1scFv基因，并采用在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列、理化性质及蛋白结构进行分析预测。【结果】抗AFB1scFv基因全长744bp，编码248个氨基酸，分子量为26312.05Da，理论等电点（pI）5.70，其二级结构中含有35个α-螺旋（占14.11%）、28个β-折叠（占11.29%）、85个延伸链（占34.28%）和100个随机卷曲（占40.32%），在三级结构中连接肽卷曲将VH和VL区域牵拉而相互靠近，形成典型的抗体结构——沟槽结构，是scFv的抗原结合区域。【结论】构建的抗AFB1scFv其VH含有117个氨基酸、VL含有116个氨基酸，具备典型抗体结构——沟槽结构，能与抗原特异性结合。