伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立

摘要

[目的]为了区分伪狂犬病病毒疫苗免疫猪和自然感染猪,建立快速诊断的方法.[方法]利用PCR方法从伪狂犬病病毒中扩增出糖蛋白E(gE)基因的主要抗原表位区,用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-gE184,并转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,用纯化后的gE184蛋白作为包被抗原,建立间接gE184-ELISA检测方法.[结果和结论]用该方法检测290份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为93.1％.