非融合表达β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌的构建和性能研究

摘要

目的构建能非融合表达高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,并对其酶活性和分泌性能进行研究。方法提取能在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶的重组质粒pMG36e-lacZ1.1480和pMG36e-lacZwch9901,电转化乳酸乳球菌乳酸亚种MG1363。测定重组菌在不同培养时间和乳糖浓度下的β-半乳糖苷酶活性,及在不同培养条件下的酶分泌率。结果携带pMG36e-lacZwch9901的重组乳酸乳球菌(MG1363/pMG36e-lacZ wch9901)具最高酶活性,其β-半乳糖苷酶活性达(16.95±0.09)U/mgpro,为基因初始菌的2.75倍;重组乳酸乳球菌培养24h产酶达高峰;培养基含乳糖时,重组菌酶活测定结果表现为降低;重组乳酸乳球菌表达的β-半乳糖苷酶可分泌到培养基中,当培养基不含红霉素,而含20g/L乳糖时,分泌率最高,达(27.09±0.05)%。结论获得了能非融合表达和分泌高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,可在此基础上进一步研制β-半乳糖苷酶活菌释放体。