pcDNA3.1-GCNF真核表达载体构建及其对HeLa细胞凋亡的影响

摘要

构建人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体,并瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞凋亡的影响。采用PCR的方法从pMD18-T-GCNF载体中扩增全长GCNF cDNA,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),测序鉴定后,重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,RT-PCR以及间接免疫荧光鉴定转染结果,并用Annexin V-PI双染流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果显示,克隆的重组真核表达载体经序列测定分析后,证实pcDNA3.1-GCNF重组真核表达质粒构建成功,并获得瞬时转染pcDNA3.1-GCNF的HeLa细胞。流式细胞术检测:转染重组质粒组的细胞凋亡率(6.72%)低于转染空质粒组(9.78%)以及未转染组(9.34%),P<0.00313,转染重组质粒后细胞凋亡率降低。由此可知,pcDNA3.1-GCNF重组质粒瞬时转染子宫颈癌HeLa细胞后,GCNF基因可以抑制HeLa细胞凋亡。