GPSM2真核表达载体构建及对人胰腺癌细胞迁移能力的影响

摘要

研究目的：
　　本实验通过构建G蛋白信号调节蛋白2（G-protein signaling modulator2,GPSM2）稳定高表达的胰腺癌细胞株，研究GPSM2与人胰腺癌细胞迁移能力的关系。探讨以GPSM2作分子靶点，为胰腺癌的治疗提供新思路和新策略。
　　研究方法:
　　1、构建GPSM2基因过表达质粒，并转染人胰腺癌MIA-PaCa-2细胞株。
　　2、采用RT-PCR技术检测GPSM2基因转染组、未转染组（空白对照组）和空载体pCMV-Tag3B转染组（阴性对照组）中GPSM2基因mRNA的表达水平。
　　3、Western-blot检测各组胰腺癌细胞GPSM2、β-连环蛋白（β-catenin）的表达。
　　4、采用Transwell实验检测各组胰腺癌细胞迁移能力变化。
　　研究结果：
　　1、成功构建了GPSM2稳定高表达的重组细胞株。
　　2、RT-PCR结果显示GPSM2基因转染组的mRNA表达量较阴性对照组及空白对照组明显增加（均P<0.01），与空白对照组相比，GPSM2基因上调效率达到了73.3倍。阴性对照组与空白对照组间GPSM2 mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）
　　3、Western-blot结果证实GPSM2基因重组细胞株中GPSM2蛋白、β-catenin蛋白均高表达（均P<0.05）。阴性对照组与空白对照组间GPSM2蛋白及β-catenin蛋白表达水平差异无统计学意义（均P>0.05）。采用一元线性回归分析得出胰腺癌细胞中GPSM2与β-catenin的表达水平呈正比（P<0.05）。
　　4、Transwell实验发现GPSM2稳定高表达的胰腺癌细胞株的迁移细胞计数明显高于阴性对照组及空白对照组（均P<0.01）。
　　结论：
　　GPSM2稳定高表达的胰腺癌细胞株的迁移细胞计数明显增加，在人胰腺癌细胞中上调GPSM2的表达能使β-catenin蛋白高表达，可能由此促进人胰腺癌细胞的迁移能力。

目录

声明

英文缩略语索引

第一章 前言

1.3研究内容

第二章 实验材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3数据统计分析

第三章 实验结果

3.4 GPSM2转染组细胞GPSM2、β-catenin蛋白的高表达

3.5 Transwell迁移细胞计数

第四章 讨论

4.2β-连环蛋白在肿瘤侵袭转移中的作用

4.3 GPSM2的过表达与胰腺癌细胞迁移能力的关系

第五章 结论与展望

参考文献

综述: 胰腺癌侵袭转移中涉及的关键生物学过程

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文