陆地棉GDP-L-半乳糖磷酸化酶基因启动子的克隆及活性分析

摘要

抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)在植物发育和响应逆境胁迫过程中发挥着重要作用.GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GDP-L galactose phosphorylase,GGPase)是AsA合成过程中关键酶之一,在AsA的生物合成和代谢调控中具有重要作用.为深入了解棉花GhGGPase基因的表达调控模式,本研究利用PCR技术克隆得到GhGGPase基因起始密码子上游2 464 bp的启动子序列,序列分析发现该启动子包含多个参与激素信号、光调节和抗逆信号应答的顺式作用元件.构建pGhGGPase::GFP-GUS过量表达载体,采用农杆菌介导法瞬时转化烟草叶片,进行GUS组织化学染色和酶活性检测,GUS染色实验结果显示,瞬时转化启动子的烟草叶片表现出较深的蓝色,并且具有较高的酶活性表达,这表明GhGGPase启动子能够显著的驱动GUS的表达.以上结果表明:GhGGPase启动子是一个完整的功能序列,具有较强的表达活性.