癌症生物标记物是一种新的早期癌症治疗工具,它既可用于癌细胞抑制,也可用于将其杀灭.癌干细胞已被证明是癌症的一个关键标志细胞.最近,随着单克隆抗体技术的发展生物标记物的研究发展迅速,一些重要的癌干细胞标记已被确认.单克隆抗体是癌标记物应用的重要技术,也是临床诊断和治疗重要手段.本研究的癌干细胞标记物CD44,CD133和ABCG2,分别通过Genestar等软件分析,并选定目标抗原特异性的基板的基因,设计出目标基因的模板和引物.经过免疫分析,设计出编码基因,利用PCR克隆技术,将其并插入预先选定的pGEX-4T-1或pET32a质粒上的克隆位点上.载有预定基因的标记物,通过载体转入感受态的E.coli BL21中,在加入IPTG的条件下,诱导其蛋白质的表达,得到目标蛋白质产物。利用SDS-PAGE和Western Blot analysis,验证其表达的正确性.研究的目标蛋白质片段CD44、CD133和ABCG2,可以用于癌干细胞进一步的研究和其单克隆抗体的制作.
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