miR-802通过Fzd5-Creb1-Sox9信号轴调控小鼠胰腺祖细胞增殖及分化

摘要

目的探讨miR-802在小鼠胰腺祖细胞(PPCs)干性维持及增殖调控中的具体作用及其潜在机制。方法采用基于基质胶和甲基纤维素的三维半固体培养体系,从小鼠胰腺导管组织中筛选并培养PPCs,并通过慢病毒介导的miR-802过表达和敲减策略,系统研究其生物学效应。通过免疫荧光检测PPCs干性基因Pdx1及增殖标志Ki67的表达水平,采用流式细胞术分析CD133阳性细胞比例,并运用荧光定量PCR检测干性、增殖及内分泌分化相关基因(Pdx1、Ki67、CD133、Ins1、Ins2、Ngn3、NeuroD1)的表达情况。此外,采用Western blot检测Fzd5、磷酸化Creb1(p-Creb1)、Creb1及Sox9蛋白的表达水平。结果敲减miR-802可显著促进PPCs的单克隆集落形成能力(P<0.01),增加集落直径(P<0.05),并提升细胞增殖能力(P<0.001),同时上调干性基因Pdx1和CD133的表达水平(P<0.001),并下调内分泌分化基因Ngn3和NeuroD1的表达水平(P<0.05)。相反,过表达miR-802则显著抑制单克隆集落形成能力(P<0.01),减小集落直径(P<0.05),抑制细胞增殖能力(P<0.01),抑制干性基因Pdx1和CD133表达(P<0.01),并促进内分泌分化基因Ins1、Ins2、Ngn3和NeuroD的表达(P<0.01)。此外,在miR-802敲除小鼠胰腺组织中,CD133/Ki67双阳性细胞比例明显增加(P<0.001)。进一步研究表明,敲减miR-802可上调Fzd5表达(P<0.05),促进Creb1磷酸化水平(P<0.01),并促进Sox9表达(P<0.001);过表达miR-802则下调Fzd5表达(P<0.001),抑制Creb1磷酸化水平(P<0.001),并抑制Sox9表达(P<0.001)。结论miR-802可通过调控Fzd5-Creb1-Sox9信号轴,促进PPCs增殖和干性基因表达并抑制内分泌分化基因表达,从而调控PPCs的增殖及分化平衡。