miR-223-3p调控人肝星状细胞增殖及迁移的作用及分子机制

摘要

目的探讨miR-223-3p抑制人肝星状细胞LX-2增殖、迁移的作用及分子机制。方法以TGF-β1诱导活化的LX-2细胞为研究对象,分为空白对照组、miR-223-3p mimics组、NC mimics组,分别采用空白溶剂、miR-223-3p mimics、模拟物对照(NC mimics)转染干预24,48 h。采用CCK-8法检测miR-223-3p mimics对LX-2细胞增殖活性的影响,划痕实验检测miR-223-3p mimics对LX-2细胞迁移的抑制作用。采用miRNA靶基因预测数据库Targetscan、miRanda预测miR-223-3p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因,RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-223-3p mimics对NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达的影响。结果与空白组及NC mimics相比,miR-223-3p mimics组LX-2细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.05)。靶基因预测结果显示NLRP3与miR-223-3p碱基序列存在8个连续的碱基互补配对,表明NLRP3可能为miR-223-3p的下游靶基因。双荧光素酶报告基因实验显示,NLRP3为miR-223-3p的靶基因。实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示,与空白组及阴性对照NC mimics组相比,miR-223-3p mimics组LX-2细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论miR-223-3p通过靶向作用于NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路进而抑制人肝星状细胞株LX-2的增殖及迁移。