HBV BCP区1762/1764和1896突变位点检测新技术研究

摘要

目的:利用错配扩增和荧光PCR原理,建立一种针对HBV BCP区1762/1764和前C区1896突变位点的新型检测方法——错配扩增突变分析PCR法(MAMA-PCR),并对该方法进行临床评价。方法:a)MAMAPCR突变检测方法性能评估:以野生和突变性阳性参考品作为模板检测3次,分析该方法稳定性;将突变型和野生型质控品梯度比例混合,分析该方法检测混合感染的检测效率。b)测序法、商品化试剂盒与本方法同时检测样本并对MAMA-PCR方法做出评价。结果:MAMA-PCR 3次检测重复性良好,CV值均小于5%,且可稳定检出含1%突变含量的混合样本。132例HBV样本中,1762/1764双突变位点测序法检出67例,ARMS-PCR试剂盒检出69例,MAMA-PCR检出69例,突变检出率分别为50.8%、52.3%和52.3%;1896突变测序法检出39例,ARMSPCR试剂盒检出41例,MAMA-PCR检出42例,突变检出率分别为29.5%、31.1%和31.8%。结论:MAMA-PCR检测方法性能稳定,突变检出率高于测序法,与商用试剂盒基本一致,可用于临床乙肝患者BCP区1762/1764双突变和前C区1896突变位点的快速检测。