黄斑蓝子鱼Δ6Δ5 Fads2蛋白重组表达和多克隆抗体的制备

摘要

黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus)是首个被发现具有长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)合成能力的海水鱼类,而脂肪酸去饱和酶(Fads2)是内源性合成LC-PUFA的关键限速酶.为深入研究鱼类Δ6Δ5 Fads2的生物学功能及其表达调控机制,本研究选取黄斑蓝子鱼Δ6Δ5 fads2基因的编码区序列长255 bp,通过限制性内切酶EcoR I和BamH I双酶切,将其插入质粒pGEX-6p-1,获得Δ6Δ5 fads2基因的重组表达载体,经IPTG诱导表达获得大量重组表达蛋白.以纯化后的Δ6Δ5 Fads2重组蛋白为抗原注射免疫KM小鼠后提取血清,并进行Western blot鉴定产生多克隆抗体的特异性.结果表明,本研究成功构建了pGEX-6p-1-Δ6Δ5 Fads2原核表达载体,表达纯化后获得大小约35.4 ku的Δ6Δ5 Fads2重组表达蛋白,利用KM小鼠得到的多克隆抗体特异性好,其效价约为1∶3.2×104.该抗体可为深入研究鱼类Δ6Δ5 Fads2的生物学功能及其表达调控机制提供基础条件,从而有助于研发提高鱼体内源性LC-PUFA合成能力的方法,降低养殖鱼类饲料中鱼油添加比例,促进养殖业的健康发展.