盐藻(Dunaliella viridis)细菌人工染色体文库的构建和鉴定

摘要

盐藻具有极强的耐盐能力,是研究植物耐盐机制的模式系统.为了对其耐盐机制进行深入的研究,以pCC1BAC为载体,构建了盐藻的细菌人工染色体(BAC)文库.该文库共有9 216个转化子,插入片段平均长度为55kb,以单克隆形式保藏在96块96孔板中,并建立了四维PCR基因筛选体系,可以通过4轮PCR快速筛选获得阳性单克隆.根据本实验室分离到的两个盐藻基因的cDNA序列(DvSPT2和DvTPSP)设计引物,通过PCR从该文库中各筛到4个阳性BAC克隆,说明该文库能有效用于分离盐藻基因的基因组序列,据此推测该文库约覆盖4倍盐藻基因组序列.