大鼠中性氨基酸转运蛋白HA-SNAT3融合蛋白的构建和鉴定

摘要

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT3是SLC38基因家族N系统的成员之一,主要在脑部和视网膜的星形胶质细胞中表达,负责转运谷氨酰胺,在脑部和肝脏的谷氨酸-谷氨酰胺循环中发挥重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接的方法将HA标签连接到质粒pBK-CMV△(1098-1300)-SNA T3中大鼠SNAT3的N端,构建了真核生物表达载体pBK-CMV△-SNA T3.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293T cells),通过Western blotting检测HA-SNAT3融合蛋白的表达.结果表明,HA-SNAT3能够正确在细胞膜上表达.pBKCMV△-SNAT3表达载体的成功构建对于进一步研究SNAT3的结构和功能提供了有效方法.