重组人白介素1受体拮抗剂对肝细胞的保护作用

摘要

目的·利用HepG2细胞建立D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-Gal N)体外肝细胞损伤模型,研究重组人白介素1受体拮抗剂(recombinant human IL-1Ra,rh IL-1Ra)对肝细胞的保护作用。方法·建立D-Gal N诱导HepG2细胞损伤模型,将HepG2细胞放置于含有不同浓度的D-Gal N培养基中(0.02、0.2、2、4 mg/m L),在第1、2和3日分别观察细胞形态和活力变化,优化D-Gal N浓度和处理时间;研究不同IL-1Ra浓度(10、20、50μg/m L)处理的D-Gal N损伤模型细胞形态变化,测定细胞活力;分析各组细胞凋亡情况和各组胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,运用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测各组细胞中凋亡诱导相关细胞因子白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6 (interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的m RNA水平,并采用ERK1/2通路抑制剂(SCH772984)检测IL-1Ra是否是通过促进肝损伤细胞ERK1/2磷酸化的方式来保护肝细胞。结果·采用4 mg/m L浓度的D-Gal N处理HepG2细胞2 d后,细胞活力显著下降;rh IL-1Ra显著提高损伤模型细胞的存活率,减少细胞中ROS的生成,显著抑制D-Gal N诱导的细胞内凋亡诱导相关细胞因子的表达;ERK1/2信号途径在介导IL-1Ra保护肝细胞的损伤过程中有一定的作用。结论·rh IL-1Ra可直接靶向肝细胞,并通过在细胞内上调ERK1/2信号通路的活化水平,抑制细胞凋亡,发挥对肝损伤细胞的保护作用。