纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶活性测定

摘要

纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶(GDH)是纳豆发酵产氨的关键酶。本文以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,根据枯草芽孢杆菌的GDH编码基因(RocG)序列设计引物,进行PCR扩增,再经pMD19-T质粒TA克隆,获得了全长为1275bp、与RocG基因同源性为98%的纳豆芽孢杆菌GDH的编码基因。构建原核表达载体pET28a-GDH,转化至E.coliBL21(DE3)进行体外诱导表达。表达的包涵体在超声破菌、变性、纯化和复性后,经SDS-PAGE分析得到了47kDa的特异条带。纳豆芽孢杆菌GDH同时具有NAD+和NADP+依赖活性,酶活分别为6.7723U·mg-1蛋白和9.4205U·mg-1蛋白。