一种基于PCR技术快速筛选低能离子注入重组菌株的方法

摘要

为拓展基于低能离子注入介导药用植物基因组DNA转化酵母、构建能生产天然产物的酵母重组菌的广泛应用,以目标产物龙胆苦苷生物合成途径中的关键酶基因(GGPPS,MECPS和MECT)为分子筛选标记,以基于低能离子注入随机转化重组菌DNA为模板进行PCR扩增,实现对其高通量初筛,利用HPLC方法对初筛所得菌株发酵产物进行分析检测.结果,从1 072株转化酵母菌中初筛出12株候选酵母重组菌,经HPLC复筛后,其中5株重组酵母菌的发酵产物中检测出龙胆苦苷.研究表明,此PCR筛选方法,具有高效、简单、周期短、廉价、易于操作等优点,适用于低能离子注入介导基因组DNA大分子随机转化酵母,构建能生物合成天然产物的酵母重组菌的研究中.