β人绒毛膜促性腺激素在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要

目的在毕赤酵母表达系统中获得β人绒毛膜促性腺激素(hCG)高效分泌表达,并鉴定其抗原活性.方法将β hCG基因亚克隆入pPIC9K表达载体,线性化后转化GS115酵母细胞,经G418抗性筛选获多拷贝重组子并诱导表达.表达产物采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot、酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定. 结果经甲醇诱导,酵母细胞表达出β hCG,此蛋白在SDS-PAGE电泳上显示为一条分子量为32×103阳性条带,在Western blot试验中能被β hCG多抗识别,在竞争抑制性ELISA中能抑制β hCG单抗与hCG全分子的结合.结论β hCG在毕赤酵母中得到高效表达,并形成正确的蛋白结构.