环介导等温扩增技术在弓形虫感染小鼠腹腔液检测中的应用

摘要

目的 环介导等温扩增(LAMP)检测弓形虫感染小鼠腹腔液的反应条件及反应体系的优化与筛选.方法 建立弓形虫感染小鼠模型,酚氯仿法抽提小鼠腹腔液DNA作为反应模板,在弓形虫大小为529 bp的高度重复序列中选择一段靶序列设计内外引物,建立LAMP反应并对反应体系及条件中Mg2+、甜菜碱及反应温度条件进行优化.结果 所建立的LAMP反应以Mg2+浓度和反应温度影响较为明显,而甜菜碱浓度变化的影响不大,优化后的LAMP反应体系能够特异性扩增弓形虫感染小鼠的腹水微量DNA,且对日本血吸虫、肝吸虫及盾盘吸虫的DNA的扩增显示为阴性.结论 以弓形虫529 bp建立并优化后的LAMP技术可以检测到弓形虫微量DNA,并且具有较好的特异性,可对人体弓形虫轻度感染诊断技术的建立提供一定的科学依据.