以ODA为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

摘要

以玻碳电极为工作电极研究了邻联茴香胺(ODA)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶(HRP)及其标记物的方法.HRP能够催化H2O2氧化ODA,其反应产物在玻碳电极上-0.31 V (vs.Ag/AgCl) 左右被还原产生一个灵敏的还原峰,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大,借助此还原电流可以测定HRP,并可用于以HRP为标记物的酶免疫分析.对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究,在最佳实验条件下测定游离HRP的线性范围是4.0×10-10 ～ 6.0×10-8 g*mL-1,检测限为3.3×10-10 g*mL-1;测定游离的酶标记物(IgG-HRP),稀释范围为1∶2000 ～ 1∶1000000,最大稀释比为1∶1000000.