人NK细胞的体外扩增及其基因表达通路的研究

摘要

目的通过自然杀伤(NK)细胞体外培养和转录组学测序(RNA-seq)技术研究人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),应用NK细胞培养法进行培养。采用流式细胞术、ELISA法和磁性细胞分选技术分析体外培养扩增不同阶段的NK细胞。获得纯化后的NK细胞进行RNA-seq检测,分析人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。结果体外培养14 d后,NK细胞(CD3-CD56+)的比例达到90%以上。第10、14天NK细胞的杀伤活性均较第0天明显增强,且随着效靶比从5∶1、10∶1到20∶1,各组NK细胞对K562细胞的杀伤活性均逐步提高(F=124.40~5512.00,P<0.05)。培养至第14天的NK细胞IFN-γ的分泌量显著高于第0、10天(q=67.17、7.75,P<0.05)。RNA-seq分析结果显示,第10、14天NK细胞与第0天NK细胞相比差异表达基因(DEGs)均较多,且第10天DEGs多于第14天。GO功能和KEGG通路富集分析显示这些DEGs主要与炎症反应、免疫反应、细胞分裂和增殖相关,而且显著富集在细胞周期、成骨细胞分化、造血细胞调控、NF-Kappa B等信号通路。结论本研究发现CD16抗体联合5种细胞因子的培养方法可以有效诱导PBMC成为NK细胞,为NK细胞免疫治疗提供了理论基础和实验依据。