改良型人NK细胞体外扩增技术建立及CAR-NK细胞治疗技术初步研究

摘要

NK细胞过继疗法是肿瘤免疫疗法的一种具有前景的治疗策略，然而，大量扩增具有功能的NK细胞方法的缺乏限制了它的发展。由于IL21分子是NK细胞功能的重要调节分子，因此本文的主要目的之一是建立一种改良型的基于IL21分子的NK细胞体外扩增技术。在本文中，我们在稳定表达IL15和CD137L分子的pAPC细胞上再进一步表达 IL21分子，然后用构建的该工程细胞株（命名为pAPCNK）来扩增NK细胞。具体方法为：分离4名健康人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），采用工程细胞pAPCNK并补充细胞因子IL2对NK细胞进行体外扩增，应用细胞计数法和流式细胞术分别比较NK细胞的扩增倍数和NK细胞纯度，并采用CFSE/7-AAD法对肿瘤细胞K562和RPMI-8226进行细胞毒性试验检测杀伤效率。经过三周的刺激培养，NK细胞平均扩增至409.4倍，细胞纯度由最初的低于20％提高到90%以上。杀伤实验结果显示，扩增的NK细胞对K562细胞杀伤率高达85.2%。
　　但由于 NK细胞非抗原特异性的杀伤特征，会限制其临床上的治疗效果。近年来过继性细胞治疗技术中，嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）修饰的T细胞技术异军突起，在体外和临床试验中表现出良好的靶向性、杀伤性和持久性，展示了巨大的应用潜力和发展前景。因此本研究在NK细胞扩增技术体系建立的基础上，尝试开发CAR-NK细胞治疗技术，从而提高NK细胞活性并且让 NK细胞具备肿瘤抗原特异性杀伤能力。本研究选用 HER2作为靶点来探索开发CAR-NK细胞治疗技术的可能性，并积累了初步的实验数据，为进一步建立完善的CAR-NK细胞治疗技术提供了依据。

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引言

材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

结果

3.1 IL21/pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP分子构建

3.2 IL21/pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP慢病毒包装

3.3 IL21/pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP慢病毒感染pAPC细胞

3.4不同浓度IL2对NK细胞扩增表型的影响

3.5不同浓度IL2对NK细胞扩增倍数的影响

3.6不同样本NK细胞体外扩增效率

3.7 NK细胞对肿瘤细胞的杀伤效果

3.8 CAR-T/CAR-NK技术建立

讨论

参考文献

综述: NK细胞免疫治疗研究进展

硕士期间科研成果

致谢