白介素-36α在烟曲霉感染的人角膜上皮细胞免疫反应中的作用及其机制

摘要

目的研究白细胞介素-36α（IL-36α）在烟曲霉菌感染的永生化人角膜上皮细胞（HCEC）免疫反应中的作用及其机制。方法烟曲霉菌灭活菌丝刺激体外培养的HCEC细胞,分别采用蛋白免疫印迹（Western Blot）实验及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测细胞中白细胞介素36α（IL-36α）、IL-36R蛋白及mRNA的表达。将细胞按实验要求分为A、B、C组,A组采用IgG重组蛋白处理HCEC细胞,B、C组分别采用IgG重组蛋白、外源性IL-36α重组蛋白（rhIL-36α）预处理后加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,分别采用ELISA和RT-PCR方法检测各组细胞中IL-8和肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA的表达。将HCEC细胞按照实验需要分为D、E、F组,D组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,E组采用rhIL-36α和外源性IL-36Ra重组蛋白（rhIL-36Ra）处理HCEC细胞,F组采用rhIL-36α处理HCEC细胞,采用Western Blot方法检测各组细胞中核因子κB（NF-κB） p65蛋白、磷酸化NF-κB p65（pNF-κB p65）蛋白的表达。将HCEC细胞按照实验需要分为G、H、I组。G组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,H组采用烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,I组采用Dectin-1中和抗体预处理后,加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,采用Western Blot及RT-PCR方法检测各组细胞中IL-36α蛋白及mRNA的表达。结果烟曲霉菌灭活菌丝刺激的HCEC细胞中IL-36α蛋白和mRNA随时间改变表达逐步升高（F=21.88、249.74,P＜0.05）。C组细胞中IL-8和TNF-α蛋白和mRNA的表达水平明显高于A、B组（F=11.54～95.42,P＜0.05）。与D、E组相比,F组细胞中pNF-κB p65蛋白的表达水平明显升高,差异均有显著性（F=52.43,P＜0.05）。I组细胞中IL-36α蛋白和mRNA表达水平较H组明显降低,差异均具有显著意义（F=70.99、34.26,P＜0.05）。结论 IL-36α在烟曲霉菌感染的人角膜上皮细胞免疫反应中起到促炎的作用,其作用可能是通过IL-36α/IL-36R/NF-κB信号通路实现的。