葛根素通过抑制MAPK/NF-κB信号通路调节LPS诱导的人牙髓干细胞的炎症损伤和成骨分化

摘要

目的:探讨葛根素(PR)对炎症条件下人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响及机制。方法:分离培养hDPSCs,CCK-8法检测PR对hDPSCs增殖活力的影响。将hDPSCs分为对照组、脂多糖(LPS)组、p38 MAPK抑制剂SB203580组(20μmol/L)、20μmol/L PR组、40μmol/L PR组、40μmol/L PR+20μmol/L SB203580组,采用LPS诱导建立体外hDPSCs炎症模型。通过乳酸脱氢酶(LDH)测定法、茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)活性测定评估PR对LPS诱导的hDPSCs细胞毒性和成骨分化能力的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中炎症(IL-6、IL-1β、TNF-α)和成骨分化相关基因(RUNX2、OCN、BSP)表达,Western blot检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白表达。结果:20和40μmol/L的PR可显著增加hDPSCs的增殖活力,增强LPS刺激的hDPSCs中ALP活性、矿化结节和成骨分化相关基因的表达,降低LDH活性和炎症相关基因表达,抑制IκBα的磷酸化降解和NF-κB p65、p38 MAPK的磷酸化(均P<0.05)。40μmol/L PR与SB203580对MAPK信号通路的抑制作用接近,两者联用对MAPK/NF-κB信号通路的抑制作用和炎症状态下hDPSCs成骨分化的促进作用明显优于两者单独应用。结论:PR可减轻LPS诱导的hDPSCs炎症损伤,促进炎症状态下hDPSCs成骨分化;其作用机制可能与抑制MAPK/NF-κB信号通路有关。