金黄色葡萄球菌感染下骨细胞对破骨细胞分化形成的影响研究

摘要

目的探讨金黄色葡萄球菌感染下,骨细胞对破骨细胞分化形成的影响。方法金黄色葡萄球菌感染骨细胞4 h后,灭活金黄色葡萄球菌,换液后细胞继续培养72 h。收集获得骨细胞源性的条件培养基(conditioned medium,CM),使用30%CM(诱导组)、等体积磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS;空白对照组)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL;阳性对照组)对破骨细胞前体细胞(RAW264.7细胞)进行诱导培养,培养5 d后通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)计数破骨细胞分化形成的数目,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测破骨细胞分化标志性基因的表达,评价其对破骨细胞分化形成的影响。结果诱导培养5 d后,TRAP染色显示:空白对照组(PBS组)基本无破骨细胞形成,条件培养基诱导组(30%CM组)及阳性对照组(RANKL组)均见破骨细胞形成,破骨细胞形成的数目经统计分析,各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05),RANKL组形成的破骨细胞数目多于30%CM组及PBS组。RT-qPCR结果显示,诱导培养5 d后,RANKL组及30%CM组破骨细胞分化形成的标志性基因:TRAP、calcitonin receptor(Cal R)、cathepsin K(Cathe K)、MMP-9的表达均高于PBS组,各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论金黄色葡萄球菌感染下,骨细胞可通过分泌某些活性因子促进破骨细胞分化形成增多,进而参与炎性骨破坏的病理过程。