健骨方对破骨细胞形成和成骨细胞增殖分化的影响

摘要

目的探讨健骨方水提物对破骨细胞分化及成骨细胞增殖分化的影响。方法制备健骨方水提物,通过MTT法测定药物对骨髓单核巨噬细胞(BMMs)细胞的毒性,采用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导BMMs分化形成破骨细胞,加入不同浓度药物进行干预,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色法测定破骨细胞分化抑制作用,采用Western Blot法测定RANKL诱导的NF-κB破骨细胞分化信号通路,运用RT-qPCR法测定信号通路下游破骨细胞分化关键基因NFATc1、C-FOS等的mRNA表达水平。以MC3T3-E1细胞作为前体成骨细胞,加入不同浓度药物进行干预,通过CCK8法测定细胞增殖能力、PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红S染色法测定细胞矿化能力。结果MTT法结果显示,健骨方细胞有毒性浓度大于500μg/mL(P<0.05),破骨细胞分化抑制IC 50为1.25μg/mL。机制研究显示健骨方显著下调了RANKL-NF-κB信号通路中的p-P65、P53的蛋白表达(P<0.05),显著抑制了通路下游C-FOS、NFATc1等的mRNA表达水平(P<0.01,P<0.05)。此外,成骨细胞活性检测显示,健骨方能明显促进MC3T3-E1细胞增殖、提高ALP活性及增加成骨细胞钙化的能力。结论健骨方具有抑制破骨细胞分化和促进成骨前体细胞增殖、分化、矿化的药效作用。其作用与抑制破骨细胞分化RANKL-NF-κB信号通路及其下游C-FOS、NFATc1等基因,上调成骨细胞分化促进因子CAL1A2、SPARC和FOSL1基因的表达有关。