CDE饮食诱导慢性肝损伤小鼠肝组织YAP信号对肝祖细胞增殖的影响

摘要

目的 探讨Yes相关蛋白(YAP)信号对胆碱缺乏/乙硫氨酸补充(CDE)饮食诱导慢性肝损伤模型小鼠肝组织胆管反应的影响以及体外对肝祖细胞增殖的影响.方法 采用CDE饮食喂养雄性野生型C57BL/6J小鼠3 w,采用Western blot和qPCR法检测肝组织YAP蛋白表达和基因水平;采用免疫组化法检测肝组织CK19表达,观察胆管反应程度;采用免疫荧光评估胆管反应细胞过程中YAP表达;采用两步灌注法分离原代肝祖细胞,以慢病毒感染肝祖细胞,将细胞分为YAP过表达(YAP-OE组)、过表达空载体(OE-control组)、YAP敲减(shYAP组)和敲减空载体(sh-control组),采用Western blot法检测肝组织YAP表达,采用CCK8和EdU实验评估YAP对肝祖细胞增殖能力的影响.结果 CDE造模组肝组织YAP蛋白表达比对照组增强,其YAP mRNA水平比对照组提高了2.45倍(P<0.01);CDE造模组肝组织胆管反应程度和肝祖细胞YAP表达显著高于对照组;EdU检测发现在相同培养条件下,YAP-OE组EdU阳性细胞比例较OE-control组显著增加[分别为(0.41±0.05)和(0.25±0.06),P<0.01],CCK8检测提示在培养72 h时YAP-OE组细胞增殖活性比OE-control组提高了1.78倍(P<0.01),而在相同培养条件下,EdU检测发现shYAP组EdU阳性细胞比例较sh-control组显著减少[分别为(0.25±0.04)和(0.13±0.02),P<0.01],在培养72h时CCK8检测提示shYAP组细胞增殖活性较sh-control组降低了1.92倍(P<0.01).结论 CDE饮食诱导小鼠慢性肝损伤导致肝组织胆管反应活跃的祖细胞YAP表达增强,YAP在体外能促进肝祖细胞增殖.