日本血吸虫感染对饮食诱导的C57BL/6J脂肪肝小鼠肝组织TNF-α, NF-kB及Ym-1 mRNA表达的影响

摘要

目的：观察日本血吸虫感染对高脂饮食诱导的C57BL/6J脂肪肝小鼠肝脏组织结构与功能、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、核因子-kB(nuclear factor kappa B,NF-kB)及巨噬细胞选择性活化标志物Ym-1 mRNA水平在肝脏组织中表达的影响,探讨血吸虫感染后巨噬细胞选择性活化对肥胖小鼠肝脏及胰岛素抵抗的影响及可能机制。
　　方法：36只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照(NC,n=12)组、高脂饮食(HF,n=12)组及高脂饮食复合日本血吸虫感染(HSj,n=12)组。HF组经高脂饮食建立肥胖模型,HSj组经高脂饮食及日本血吸虫感染建立肥胖复合血吸虫感染模型。分别于高脂喂养第6周末及12周末时检测空腹血糖（fasting peripheral blood glucose,FBG)、空腹血浆胰岛素(fasting plasma insulin,FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR),检测肝组织匀浆谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT)、甘油三酯（triglyceride,TG)及胆固醇(cholesterol,TC)水平;HE染色观察肝组织病理改变,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-RCR)检测肝脏组织TNF-α和NF-kB及M2型巨噬细胞的特异性标志物Ym-1 mRNA表达情况。
　　结果：
　　1.高脂喂养第6周末时,HF组及HSj组小鼠体重均较NC组增加?20％,肥胖模型造模成功。第12周末时,HF组体重较NC组增加,具有统计学意义(P<0.05),HSj组体重与NC组比较无统计学意义,但低于HF组(P<0.05)。
　　2.第6周末时HF组FINS、HOMA-IR较NC组升高,具有统计学意义(P<0.05),HF组FBG较NC组升高差异无统计学意义,HSj组HOMA-IR较HF组显著下降(P<0.05),而HSj组FBG、FINS与HF组比较差异无统计学意义。第12周末时HF组FBG、FINS、HOMA-IR均进一步升高且明显高于同期NC组(P<0.05),HSj组FBG、FINS、HOMA-IR均较同期HF组下降(P<0.05)。
　　3.第6周末HF组小鼠肝匀浆TG较NC组升高有统计学意义(P<0.05),TC及ALT含量与NC组比较无统计学差异。HSj组TC、TG水平较HF组下降(P<0.05),ALT变化不明显。12周末时HF组肝匀浆TC、TG、ALT进一步较NC组升高(P<0.05),HSj组TC、TG较同期HF组下降有统计学意义(P<0.05),但ALT升高(P<0.05)。
　　4.肉眼观,在第6周末时,NC组小鼠肝脏红润,HF组小鼠肝脏边缘变钝、微黄色,可见黄色脂肪斑,HSj组小鼠肝脏呈红褐色,体积较HF组肝脏小,可见颗粒状结节;第12周末时,NC组小鼠肝脏外观无明显异常,HF组及HSj组小鼠肝脏上述表现更加明显。
　　5.光学显微镜下,在第6周末和第12周末NC组小鼠肝组织HE染色均未见明显异常。第6周末时HF组小鼠肝细胞内可见大小不等的脂滴空泡,第12周末肝细胞内脂滴空泡更加明显,可见气球样变及纤维化,HSj组小鼠第6周末可见少量大小不等的脂滴空泡及肝细胞坏死,第12周末时肝细胞坏死和肝纤维化加重。第6周末及第12周末HF组肝小叶内及汇管区均可见炎性细胞浸润,较同期HSj组浸润增多。
　　6.RT-PCR在第6周和第12周末时检测HF组TNF-αmRNA及NF-kB mRNA表达均高于HSj组和NC组(P<0.05)。第6周末时,HF组Ym-1 mRNA的表达高于NC组和HSj组(P<0.05),第12周末时HSj组Ym-1 mRNA表达强度高于HF组和NC组(P<0.05),且较6周时表达增强(P<0.05)。
　　7.HF组小鼠HOMA-IR与肝组织TNF-αmRNA光密度相对值呈正相关(P<0.05),与NF-kB mRNA光密度相对值无显著相关性(P?0.05);HSj组小鼠HOMA-IR与肝组织Ym-1mRNA光密度相对值呈负相关(P<0.05)。
　　结论：
　　1.高脂饮食可诱导C57BL/6J肥胖小鼠及脂肪肝模型的建立,该模型具有胰岛素抵抗的特征。
　　2.肥胖小鼠脂肪肝组织中炎症因子TNF-α及调控因子NF-kB的表达水平与胰岛素抵抗的形成有一定的关系。
　　3.日本血吸虫感染可以增强肥胖小鼠脂肪肝肝组织中M2型巨噬细胞选择性表达水平,降低脂肪肝组织中TNF-α及NF-kB水平的表达,减轻肝脏的脂肪变性及炎性细胞的浸润,改善胰岛素抵抗,其可能的机制与M2型巨噬细胞活化时抑制M1型巨噬细胞的促炎效应有关,但可能加重肝细胞坏死及肝纤维化。

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1引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 小鼠一般情况

3.2 高脂饮食及血吸虫感染对小鼠体重的影响

3.3 高脂饮食及血吸虫感染对小鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平的影响

3.4 高脂饮食及血吸虫感染对小鼠肝组织匀浆TC、TG、ALT水平的影响

3.5 肝脏改变

3.6 C57BL/6J肥胖小鼠肝组织Ym-1 mRNA及TNF-α、NF-kB mRNA的表达

3.7 C57BL/6J肥胖小鼠肝组织Ym-1及TNF-α、NF-kB mRNA的表达分别与HOMA-IR的相关分析

4.讨论

4.1 肥胖与IR

4.2 巨噬细胞选择性活化

4.3 展望与不足

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述