CD40 siRNA对MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

摘要

目的:观察CD40的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-dsDNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的表达水平变化,RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果:注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组(141.88±7.81)mg和空载体组(153.10±7.60)mg降低至CD40-siRNA1组(78.85±5.61)mg和CD40-siRNA2组(80.25±4.07)mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的(质量)浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和(质量)浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的(质量)浓度依次为(118.74±10.32)ng/L(pg/m L)、(115.24±8.26)ng/L、(113.71±5.02)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(117.83±6.83)ng/L、(114.07±0.97)ng/L、(112.67±9.66)ng/L;CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为(7.05±0.41)ng/L、(6.34±0.76)ng/L、(5.83±0.43)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(7.07±0.22)ng/L、(6.35±0.49)ng/L、(6.12±0.80)ng/L;CD40-siRNA1组的anti-ds DNA的浓度依次为(7.51±0.29)ng/L、(6.74±0.45)ng/L、(6.32±0.39)ng/L;CD40-siRNA2组依次为(8.19±0.38)ng/L、(7.14±0.50)ng/L、(6.48±0.29)ng/L。IL-4的(质量)浓度明显升高,CD40-siRNA1组IL-4的(质量)浓度依次为(26.51±1.81)ng/L、(27.80±1.72)ng/L、(28.08±2.21)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(26.28±2.03)ng/L、(28.15±2.95)ng/L、(28.37±1.71)ng/L。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05),注射后第11和14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的(质量)浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的(质量)浓度水平,IFN-γ、IL-17、IL-4的(质量)浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-ds DNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义(P<0.05),而注射后第14天anti-ds DNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL-17和anti-ds DNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。