鳗弧菌rpoS基因克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。RpoS因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析表明含有完整的rpoS基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与其他鳗弧菌菌株的rpoS基因序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌rpoS基因的序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+),在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa,与理论分析值相近。研究结果为探索鳗弧菌对自然环境的适应及疾病发生机制提供了依据。