霍乱弧菌zot基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

从霍乱疫苗菌中抽提基因组DNA,用PCR的方法扩增zot基因.序列分析表明,zot基因编码399个氨基酸,其中4个氨基酸与文献报道有差异.将zot基因插入含T7启动子的质粒pET-28(a+)构建表达质粒pET-ZOT,转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株BLZOT.表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3-5h后,表达大量ZOT蛋白,并形成包涵体.经SDS-PAGE分析重组ZOT蛋白分子量约为47kD,凝胶自动扫描分析表明,重组ZOT约占菌体可溶性蛋白量的15%以上.本工作为进一步研究蛋白多肽类药物的口服奠定了良好的基础.