银杏小孢子叶球蛋白提取和双向电泳体系优化(Ⅱ)

摘要

以银杏小孢子叶球为材料,比较了不同的提取的方法、蛋白质裂解液组成、pH值范围以及不同质量浓度SDS-PAGE凝胶对双向电泳的影响.结果表明:TCA/丙酮/酚法比TCA/丙酮法更适合于银杏小孢子叶球蛋白的提取；含有硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出748个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白点数多620个.采用pH3-10的胶条分离时,蛋白点集中在pH=4 ～8,使用pH=4～7的胶条,图谱胶点重叠少,也较清晰,更利于低丰度蛋白的检出.用TCA/丙酮/酚提取蛋白,并以蛋白质裂解液Ⅱ溶解蛋白,采用pH=4 ～7线性17 cm的IPG胶条,12% SDS-PAGE凝胶进行双向凝胶电泳,银杏小孢子叶球蛋白质能得到较好的分离,图谱清晰.